I. préparation avant l'opération
1 - lavage et désinfection
Nettoyage par démontage: après démontage des différents composants du réacteur (corps de réservoir, lignes, électrodes, etc.), nettoyez séparément par immersion dans du détergent et une solution d'hydroxyde de sodium à 1% et rincez à l'eau purifiée plus de 10 fois.
Traitement de désinfection: les pièces lavées sont immergées dans un liquide désinfectant (dilué proportionnellement) pendant 30 minutes, en évitant tout contact direct avec la surface après séchage.
Entretien du capteur: l’électrode de pH est immergée dans une solution saturée de KCl, l’électrode de dissolution d’oxygène (do) remplace l’électrolyte et élimine les bulles, polarisée pendant plus de 6 heures.
2, assemblage du réservoir
Installation étanche: Alignez le couvercle du réservoir avec la base du corps de réservoir, serrez les vis uniformément en diagonale avec un outil hexagonal interne pour assurer l'étanchéité.
Raccordement de la ligne: raccorder les flacons de recharge, les flacons d’échappement, les flacons de prélèvement, etc. par un tube en silicone ou un raccord rapide, les électrodes étant serrées manuellement après insertion dans l’interface correspondante.
II. Opération de réservoir supérieur
1, inoculation cellulaire
Les suspensions cellulaires préculturées sont mélangées après comptage uniforme, transférées dans le flacon d'inoculation et connectées aseptiquement au tube d'alimentation du réacteur.
Utilisez de l'air comprimé pour presser la suspension cellulaire dans le réacteur et éviter la sédimentation des masses de jonction cellulaire.
2, initialisation des paramètres
Réglage de l'environnement: la température est réglée à 37 ° C (cellules de mammifères), l'oxygène soluble 40%, le pH autour de 7,0, la régulation automatique est activée via le panneau de commande.
Remplissage et ventilation: la pompe péristaltique contrôle le taux de réhydratation et le système d'admission régule la pression d'oxygène à 0,1 MPa pour assurer la stabilité de l'oxygène dissous.
Iii. Contrôle du processus de culture
1, surveillance dynamique
Couplage du capteur: surveillance en temps réel des paramètres tels que la température, le pH, l'OD, etc., le Contrôleur ajuste automatiquement la vitesse d'agitation (100 - 300 tr / min) et le taux de remplissage.
Échantillonnage en ligne: l'échantillonnage toutes les 24 heures détecte la densité cellulaire et l'état métabolique, après l'échantillonnage, l'immersion de l'extrémité de la ligne dans de l'alcool à 75% empêche la contamination.
2, prévention et contrôle de la pollution
Maintenir un environnement stérile tout au long de l'opération, utiliser une flamme pour désinfecter la bouche de connexion et éviter l'entrée d'impuretés extérieures.
Iv. Fonctionnement et entretien du réservoir inférieur
1, arrêt de la culture
Déconnectez les électrodes en fermant le module de commande automatique et en vidant le liquide de culture dans le bac à déchets par air comprimé.
Nettoyage et stockage
Retirez l'ensemble du réservoir et, après rinçage à l'eau purifiée, laissez tremper une nuit dans une solution de NaOH 0,1 m pour éliminer complètement les résidus biologiques.
Après séchage dans un endroit ventilé, les électrodes sont stockées séparément dans une boîte d'emballage spéciale.
V. principales considérations
1, contrôle d'étanchéité: après l'assemblage, vous devez effectuer un test de pression pour éviter les fuites pendant la culture.
2, étalonnage paramétrique: le pH et l'électrode do doivent être corrigés avant chaque utilisation pour assurer la précision des données.
3, agrandissement à l'échelle: suivez un rapport Volume / volume de liquide (vvm) constant pour garantir une efficacité de transfert d'oxygène soluble cohérente.
Avec les étapes ci - dessus, le Bioréacteur cellulaire en acier inoxydable permet une culture cellulaire stable du laboratoire à l'échelle pilote, adaptée aux bioprocédés de haute précision tels que la production d'anticorps, le développement de vaccins, etc.