Toshiya SatoL'équipePublié dans «Am J Physiol Regul Integr Comp PhysiolLe journalDe cet articleLe contenu de l'étude est:ParUratananesthésie（Carbamate d'éthyle) etEt sympathectomie 2 Rats diabétiques et rats non diabétiques Explorer2 Association entre une altération de la fonction vasodilatatrice parasympathique des glandes parotides associée au diabète et une diminution de la sécrétion salivaire, analyse de la relation hémodynamique et des mécanismes sous - jacents de la sécrétion salivaire des trois principales glandes salivaires (parotides, sous - maxillaires, sublinguales).

Résumé

Méthode d'imagerie tachetée au laser et de collecte de salive, enUratanAnesthésié et sympathectomisé 2 Chez les rats diabétiques et non diabétiques, on a étudié la relation entre l'hémodynamique et la sécrétion salivaire des trois principales glandes salivaires. Chez les rats diabétiques et non diabétiques, la stimulation du nerf lingual augmente rapidement le flux sanguin glandulaire et induit la sécrétion de salive par les trois grandes glandes. Augmentation de l'amplitude du flux sanguin et de la sécrétion salivaire des glandes parotides chez les rats diabétiques par rapport aux rats non diabétiquesClairementRéduit; Mais ce phénomène n'a pas été observé dans d'autres glandes telles que les glandes submaxillaires, sublinguales, etc. Bien que l'administration intraveineuse d'acétylcholine augmente le flux sanguin parotidien de manière dose - dépendante, cette réponse est plus faible chez les rats diabétiques que chez les rats non diabétiques. De même, dans les glandes parotides de rats diabétiquesM1etM3Récepteurs muscariniques de l'acétylcholine (mAChR) deARNmLe niveau d'expression est également relativement inférieur à celui des rats non diabétiques. Nos résultats montrent que,2 Le diabète de type altère la fonction vasodilatatrice parasympathique et la fonction salivaire sécrétoire des glandes parotides, et suggère qu'un trouble de la voie vasodilatatrice cholinergique pourrait être l'un des mécanismes sous - jacents responsables de l'altération de la fonction vasodilatatrice glandulaire parasympathique.

ExpérimentationsMatériaux et instruments

I) matériel expérimental

Animaux de laboratoire

◦2 Modèle de diabète de type rat:8 à 10L'âge à la semaine (prédiabète) et45 à 50Mâles à l'âge de la semaine (stade de diabète chronique)OLETFRat, ce rat à cause de la cholécystokinine (CCK) et-1 Une carence en récepteurs conduit à des aliments multiples et est induite par des gènes récessifs multiples et la régulation de la testostérone2 Diabète de type;

◦Rats témoins non diabétiques: mâles du même âgeLetoRats;

Médicaments expérimentaux

◦Anesthésie associée: isofluorane,Uratan

◦Relaxant musculaire: bromure de pancuronium;

◦Neurotransmetteurs et solvants: acétylcholine, sérum physiologique stérile;

◦Réactifs de biologie moléculaire:TRIzol/ARNmRéactifs,FastStart Essential DNA Green Master, pourM1-M5 mAChRetbêta-Actine (β-actine), des amorces spécifiques.

Ii) Instruments expérimentaux

1. Instruments de mesure du flux sanguin

Omegawave OZ-2Imageur de flux sanguin tacheté laser:Adoption780 nmDiffusion laser semi - conducteur irradiant la glande, obtenir un diagramme de flux sanguin bidimensionnelEtPar MatchingpaletteAnalyse logicielle zones d'intérêtdeSignaux de flux sanguin;

Omegawave FLO-C1Débitmètre laser Doppler:Utilisé pour surveiller les changements de flux sanguin sur le côté gauche de la lèvre inférieure, tous les enregistrements sont étalonnés pour un débit sanguin nul, les changements de flux sanguin sont en unités arbitraires (a.u.) représente.

Omegawave FLO-C1Débitmètre laser Doppler

Omegawave OZ-2Imageur de flux sanguin tacheté laser

Schéma du site de stimulation électrique, du site de mesure du débit sanguin et de la méthode de collecte de salive chez le rat

Un: le site d'irritation est le nerf lingual (LN), l'extrémité centrale coupée.

B etC: site de mesure du débit sanguin:C. BFigure détermination des glandes parotides par la technique d'imagerie tachetée au laser (PG), glandes sous - mandibulaires (SMG), et les glandes sublinguales (SLG), le flux sanguin;CFigure utilisant un fluidimètre Doppler Laser (LDF), détermine le flux sanguin vers la lèvre inférieure.

D: méthode d'enregistrement de la sécrétion salivaire: la salive est collectée par un cathéter en polyéthylène via un tube Wharton; Placer des boules de coton dans la bouche pour recueillir la salive; Utilisez un dispositif de détection d'humidité pour déterminer la valeur de l'humidité de la muqueuse.

Instruments de surveillance des paramètres physiologiques

Analyseur de glycémie de type petite électrode、Ventilateur、Analyseur infrarouge、Stimulateurs électroniques.

Instrument de détection de l'humidité de la salive et des muqueuses

Détecteur d'humidité、Tubes en polyéthylène, billes de coton pré - pesées, balances de précision.

Processus expérimental

1. Préparation des animaux et gestion de l'anesthésie

2. Mesure du poids et de la glycémie

Jeûne du rat avant l'expérience 15 Heures, pesée du poids corporel après anesthésie à l'isofluane; Prélèvement de sang dans la veine caudale environ20 μL, avecAntsense DuoUn analyseur de glycémie détecte la glycémie à jeun, mesure par échantillon2 Prendre la moyenne secondaire.

3. Détection du débit sanguin glandulaire et de la conductivité vasculaire

Position couchée horizontale du rat,Omegawave FLO-C1Débitmètre laser DopplerLaser irradiant les trois grandes glandes salivaires,Omegawave OZ-2Imageur de flux sanguin tacheté laserL'acquisition de lumière diffusée génère une image tachetée originale (reflétant le nombre de globules rouges)/Vitesse);LDFSurveiller le flux sanguin vers le côté gauche de la lèvre inférieure.

Chez les rats diabétiques (cercle solide, taille de l'échantillon par groupe n = 6), avec des rats non diabétiques (cercles creux, taille de l'échantillon par groupe)n = 6Le prédiabète et la phase chronique du diabète, adoptéOmegawave OZ-2Imageur de flux sanguin tacheté laserDétermination du flux sanguin au repos dans les glandes et la lèvre inférieure [Unités arbitraires (a.u.) et]

4. Stimulation nerveuse linguale et administration d'acétylcholine

5. Sécrétion salivaire et mesure de l'humidité de la muqueuse buccale

6. en temps réelRT-PCRdétectionARNm mAChRexpression

7. Analyse statistique

Conclusion de l'expérimentation

2 Le diabète de type altère principalement la fonction vasodilatatrice parasympathique et la fonction salivaire de la glande parotide, alors qu'il affecte moins les glandes sous - maxillaires, sublinguales; Troubles de la voie vasodilatatrice cholinergique (en particulierM1Et,M3 mAChRExpression réduite) est un mécanisme sous - jacent de l'altération de l'augmentation du flux sanguin médiée par le parasympathique parotidien, et des anomalies hémodynamiques glandulaires peuvent être impliquées dans la sécheresse buccale liée au diabète (xérostomie), l'occurrence.