Toru NishikawaÉquipe publié dans« deJournal de l'International College of DentistryLe)L 'étudePar streptozotocine (STZ), induisant l'établissement d'un modèle de rat diabétique dans lequel une parodontite expérimentale est induite à l'oxyde nitrique (NON) la voie estFocus, enquêter sur les mécanismes de l'aggravation de la maladie parodontale dans l'état de diabète, en se concentrant sur l'analyse du flux sanguin gingival, des gènes liés à l'inflammation (facteur de nécrose tumorale)α/TNF-α, oxyde nitrique synthase induite/ iNOS), expression et modification des marqueurs de stress Nitroso (Nitrotyrosine).

Résumé

"Objectif" pour clarifier le mécanisme de l'exacerbation de la maladie parodontale dans l'état diabétique, cette étude a été réalisée par streptozotocine (STZ), induisant l'établissement d'un modèle de rat diabétique dans lequel une parodontite expérimentale a été induite et exprimée en oxyde nitrique (NON) la voie estFocusDévelopper une exploration.

Matériaux et méthodes 5 Sexe masculin hebdomadaireSDRat, par injection intrapéritonéaleSTZ(60 mg/kg), induisent le diabète.STZInjections2 Après la semaine, sur la deuxième molaire droite de la mâchoire supérieure (M2) de ligature du cou dentaire fil de nylon (3 - 0 sur giron), pour induire une parodontite expérimentale, ce côté servant de côté expérimental; L'autre côté n'est pas traité, comme le côté contrôle. Induction expérimentale de parodontite2 Après la semaine, le flux sanguin dans le tissu gingival a été mesuré, puis les rats ont été sacrifiés pour une analyse de l'expression génétique et un examen histologique du tissu gingival.

Le flux sanguin gingival du côté témoin des rats diabétiques était significativement inférieur à celui du côté témoin des rats normaux; Que ce soit chez les rats normaux ou diabétiques, le flux sanguin dans le tissu gingival après induction de la parodontite a augmenté de manière significative par rapport au côté témoin respectif. L'analyse de l'expression génique montre que chez le rat normal, après induction de la parodontiteTNF-αBien que l'expression des gènes ait tendance à augmenter, il n'y a pas de différence statistique, etiNOSAugmentation significative de l'expression des gènes; Chez les rats diabétiques, après induction de la parodontiteTNF-αAveciNOSL'expression des gènes a augmenté de manière significative. L'examen histologique a révélé que seule une infiltration légère de cellules inflammatoires était visible sur le site d'induction de la parodontite chez les rats normaux, alors qu'une infiltration significative de cellules inflammatoires était visible sur ce site chez les rats diabétiques. Une analyse plus approfondie de l'expression de la nitrotérosine dans le tissu gingival a révélé que les cellules positives de la nitrotérosine étaient visibles au site d'induction de la parodontite chez les rats normaux, mais que le nombre de cellules positives de la nitrotérosine augmentait significativement chez les rats diabétiques après l'induction de la parodontite.

Conclusion cette étude confirme une augmentation significative du nombre de cellules positives à la nitrotérosine dans le tissu gingival du côté expérimental des rats diabétiques, suggérant que le stress Nitroso joue un rôle important dans le processus de diabète combiné avec la maladie parodontale; Il est également suggéré que l'inhibition du stress Nitroso peut devenir l'une des stratégies de traitement de la parodontite liée au diabète.

ExpérimentationsMatériaux et instruments

I) matériel expérimental

1. Animaux de laboratoire:5 Sexe masculin hebdomadaireSDRats

2. Inducteur du diabète: streptozotocine (STZ) et;Matériau inducteur de la maladie parodontale: sutures en nylon (3 - 0 sur giron) et;Anesthésiques: (pentobarbital) et

Ii) Instruments expérimentaux

1. Omegawave FLO-N1Débitmètre laser Doppler, pour mesurer le flux sanguin dans les tissus gingivaux

Omegawave FLO-N1Débitmètre laser Doppler

Valeurs du flux sanguin dans le tissu gingival

2. Quantification de la fluorescence en temps réella PCRInstrumentation: analyse quantitative de l'expression génique

3. Microscopie optique: pour l'observation et le comptage des cellules après la coloration des coupes de tissus

4. Équipement de stockage à basse température: réservoir d'azote liquide (pour la congélation rapide des tissus),-80℃Réfrigérateur (pour organiser la conservation à long terme)

5. Coussin chauffant: utilisé pour mesurer le flux sanguin gingival lors du maintien de la température rectale chez le rat37℃

Processus expérimental

(i) Élevage d'animaux de laboratoire et établissement de modèles de diabète

1. tousSDRats élevés à température constante (23±1.0℃), humidité constante (45 ± 10%) la salle des animaux, adoptée12 Heures de lumière et d'obscurité alternant les cycles, l'eau du robinet est fournie par un dispositif automatique d'alimentation en eau.

2. Injection intrapéritonéale chez le ratSTZ(60 mg/kg), pour induire le diabète;STZInjections1 Test de la valeur de la glycémie chez le rat après la semaine, placez la glycémie≥200mg/dLLes rats ont été identifiés comme des rats modèles diabétiques, inclus dans des expériences ultérieures.

(II) induction expérimentale de parodontite

STZInjections2 Après une semaine, à tous les rats (rats normauxLe +Rats diabétiques) ont été traités: dans (0,5 mg/kg, injection intrapéritonéale) sous anesthésie, dans la deuxième molaire à droite de la mâchoire supérieure (M2) fil de suture en nylon enroulé autour du cou des dents (3 - 0 sur giron), essayez d'éviter d'endommager les gencives, nouez - les et fixez - les au couvercle de la bouche proximale (ce côté est expérimental); La deuxième molaire gauche de la mâchoire supérieure ne fait pas de traitement (côté contrôle).

(III) mesure du flux sanguin dans les tissus gingivaux

1. Après induction de la parodontite, par injection intrapéritonéale (0,5 mg/kg), anesthésier le rat, mettre un hémomètre laser Doppler (FLO-N1), la sonde est fixée du côté expérimental au côté contrôleM2La gencive buccale est directement au - dessus.

2. Pendant la mesure, le rat est placé25℃Sur un coussin chauffant pour maintenir la température rectale37℃, enregistrer la valeur du flux sanguin (en:ml/min/100g tissu).

Iv) Organisation de la collecte et du traitement

1. Induction expérimentale de parodontite 2 Après la semaine, par injection intrapéritonéale (1,5 mg/kg), le rat sacrifié.

2. Acquisition côté expérimental vs côté contrôleM2Tissu buccal des gencives: une partie est immédiatement placée dans l'azote liquide pour une congélation rapide, puis transférée à- 80℃Conservation au réfrigérateur (pour l'analyse de l'expression génétique); L'autre partie est retirée avec le tissu maxillaire bilatéral et placée dans10%Fixation de la solution formol24 Heures (pour analyse histologique).

V) Analyse de l'expression génétique

1. utiliserRéactif TRIzolExtraction totale du tissu gingival congeléARNAu total.ARNPour le modèle, avecRNase H-transcriptase inversesynthèseADNc- Oui.

2. AdoptionTaqMan Master Mix PCR universelAvecTaqManLa sonde, dansABI Prisme 7000Effectué sur instrumentsla PCRRéaction, les conditions de réaction sont95℃ 1Minutes,52℃ 1Minutes,72℃ 30Secondes, au total40 Un cycle.

3. àGAPDHPour le gène endoginseng, adoptéΔΔCtCalcul de la méthodeTNF-αAveciNOSQuantité relative d'expression des gènes.

Conclusion de l'expérimentation

Cette étude confirme une augmentation significative du nombre de cellules positives à la nitrotérosine dans le tissu gingival du côté expérimental de rats diabétiques, suggérant que le stress Nitroso joue un rôle important dans le processus de diabète combiné à la maladie parodontale; Il est également suggéré que l'inhibition du stress Nitroso peut devenir l'une des stratégies de traitement de la parodontite liée au diabète.