Informations sur les colonnes dédiées
La colonne de chromatographie spéciale venusil Stachydrine Hydrochloride hydrothréine est spécialement conçue pour l'analyse de l'hydrochlorure hydrothréine dans les plantes mères. Le produit est à base de gel de silice, la phase de liaison présente une bonne sélectivité en composés organiques basiques fortement polaires et hydrosolubles en mode chromatographie d'action hydrophile grâce à l'utilisation de groupes Amides neutres.
Hilic est un mode de chromatographie à action hydrophile dont l'élution est dans l'ordre croissant hydrophilie / polarité des composés, l'augmentation de la proportion de phase organique dans la phase mobile augmente la rétention du soluté, la phase mobile typique étant l'acétonitrile (40% - 97%) / eau (ou sels tampons volatils), tandis qu'il peut utiliser une phase mobile ou des sels tampons plus volatils, facilitant ainsi l'association avec les détecteurs de spectrométrie de masse et les détecteurs de Luminescence à la vapeur.
Carte des méthodes d'essai et d'analyse du chlorhydrate d'hydrothréine
En référence aux conditions de chromatographie sous la détermination de la teneur en une partie de la pharmacopée chinoise 2015:
Détection par détecteur à diffusion de lumière évaporée avec du gel de silice lié au propylamide comme agent de charge et une solution d'acétonitrile - 0,2% d'acide acétique glacial (80: 20) comme phase mobile. Le nombre de plateaux théoriques requis pour le calcul hydrothréobasique ne doit pas être inférieur à 6000.
Colonne chromatographique: stachdrine venusil; 5μm，4.6*250mm
Réf. De commande: vh952505 - LH
Phase mobile: acétonitrile: solution d'acide acétique glacial à 0,2% = 80: 20 (V / v)
Débit: 0,5 ml / min
Température de la colonne: 20 ℃
Détecteur: ELSD (détecteur de diffusion de la lumière par évaporation)
Quantité d'échantillon: 10 μl
Temps de rétention / min |
Nombre de plateaux théoriques |
Facteur de traînée |
17.888 |
15203 |
1.06 |
Installation
1, démontez la boîte d'emballage de colonne, confirmez le type, les spécifications de la colonne de chromatographie.
2, dévisser les bouchons d'étanchéité aux deux extrémités de la colonne et les remettre dans la boîte d'emballage pour le remplacement.
3, selon le flux de phase mobile indiqué sur le tube de la colonne, utilisez une tête PEEK et un tube PEEK ou un raccord en acier inoxydable pour connecter la colonne de chromatographie à l'instrument de détection.
4, à l'aide de raccords de petit diamètre intérieur, la colonne d'analyse utilise généralement une ligne de diamètre intérieur de 0,25 mm (0010 "), et raccourcit la longueur de la ligne de connexion, réduisant ainsi le volume mort.
Utilisation et entretien
Protection
Prendre soin de la sécurité lors de la connexion et de l'utilisation de la colonne de chromatographie, porter des gants, des masques et des miroirs de protection, et toute fuite de solvant et d'échantillon due à une raison quelconque (connexion de ligne non serrée, vieillissement de la ligne, vieillissement de la tête PEEK) en contact direct avec l'opérateur peut avoir un impact sur la santé de l'opérateur.
Direction d'utilisation
La colonne de chromatographie doit maintenir la direction de la phase mobile et la direction des flèches indiquées par la colonne de chromatographie cohérentes pendant l'utilisation, et l'utilisation inverse n'est pas recommandée en l'absence de circonstances particulières (par exemple, lors du nettoyage des contaminants de la tête de colonne avant de la colonne de chromatographie, un lavage inverse à faible débit peut être envisagé).
Activation
La phase liquide dans le corps de colonne lors de la sortie de la nouvelle colonne spéciale de chlorhydrate d'hydrothréine est l'acétonitrile, il peut y avoir un court séchage du corps de colonne pendant le stockage et le transport,Ainsi, la nouvelle colonne avant la première utilisation doit être activée avec plus de 20 fois le volume de la colonne d'acétonitrile à un débit de 0,5 ml / min avant de sélectionner les conditions opératoires nécessaires à l'expérience pour l'équilibre, si la phase mobile nécessaire à l'expérience contient du tampon, il est nécessaire d'utiliserLa transition se fait en proportion égale de la phase organique et de l'eau qui coule, évitant les phénomènes de salinisation.
Traitement avant échantillon
Afin d'éviter que les impuretés particulaires dans l'échantillon ou la phase mobile ne provoquent un colmatage de la plaque de tamis avant la colonne de chromatographie, tous les réactifs et échantillons utilisés pour l'expérience doivent être filtrés avec une membrane filtrante microporeuse de 0,45 µm ou 0,22 µm avant utilisation. Pour les échantillons dont la matrice est plus complexe, le prétraitement avec le système d'extraction en phase solide SPE est recommandé.
Phase mobile et pH de l'échantillon
Afin de permettre à la colonne de chromatographie d'obtenir une meilleure durée de vie et un meilleur effet, veuillez suivre les recommandations du fabricant pour l'utilisation de la gamme de pH, la colonne spéciale de chlorhydrate de soude pH s'applique de 2,0 à 6,0, un pH trop élevé dissout le gel de silice, un pH trop bas entraînera une chute partielle ou totale de la phase de liaison, la performance de la colonne diminue, les résultats expérimentaux ne sont pas reproduits.
Phase mobile et solvant de l'échantillon
L'utilisation de phosphates ou d'autres sels tampons insolubles avec la phase organique par la phase mobile sous un système à phase organique élevée doit être évitée et la colonne chromatographique ne doit pas être endommagée par la salinisation. Pour ne pas interférer avec le mécanisme de séparation hilic, n'utilisez pas d'acide trifluoroacétique et d'autres réactifs de paire d'ions. Si possible, essayez de sélectionner l'échantillon de dissolution de la phase mobile, n'utilisez pas d'eau ou de DMSO pour dissoudre l'échantillon et évitez l'apparition d'une détérioration du type de pic due à l'effet du solvant.
Colonne pression douce
La température maximale de fonctionnement doit être inférieure à 60 ° C, l'utilisation à long terme à haute température (> 60 ° c) endommagera la colonne de chromatographie, cette situation se manifeste le plus clairement à pH > 6,0. La colonne de chromatographie peut résister à une pression de 400 bar, mais un état de haute pression à long terme affectera les performances et la durée de vie de la colonne de chromatographie, il est recommandé que la pression de la colonne soit inférieure à 200 Bar lors de l'utilisation normale.
Colonne de protection
Lors de l'analyse d'échantillons avec des matrices plus complexes, pour une meilleure durée de vie de la colonne de chromatographie, il est recommandé d'utiliser une colonne de protection avant la colonne de chromatographie, bloquant les microparticules du système et retardant la contamination chimique de la phase stationnaire par l'échantillon.
Programme de rinçage
Une fois la colonne chromatographique utilisée, il est nécessaire de rincer au moins 20 fois le volume de la colonne à l'aide successivement d'acétonitrile 50%, d'acétonitrile 5%, d'acétonitrile 100% à 0,5 ml / min et, si la colonne est précédée d'une colonne de protection connectée, de la déconnecter de la colonne chromatographique pour rincer séparément.
stocker
Lors du stockage de la colonne de chromatographie, ne pas laisser d'eau ou de tampon dans la colonne de chromatographie, l'acétonitrile peut être utilisé comme solvant de séquestration de la colonne de chromatographie. Colonne de chromatographie utilisée depuis longtemps pour éviter que le lit de colonne ne s'assèche, il est recommandé de rincer régulièrement la colonne de chromatographie, rincer les deux colonnes de chromatographie avec un bouchon
