Le principe de fonctionnement de base de la chromatographie liquide est basé sur la séparation des coefficients de partage entre les phases fixe et mobile de chaque composant de l'échantillon. Lorsque l'échantillon mélangé est injecté dans le système de chromatographie liquide, il passe avec la phase mobile (solvant liquide tel que l'eau, le méthanol, l'acétonitrile, etc.) dans une colonne de chromatographie munie d'une phase stationnaire (matériau particulaire poreux tel que gel de silice, phase de liaison chimique, polymère, etc.). Du fait de la différence des forces d'interaction entre les différents Constituents et la phase stationnaire telles que l'adsorption, la distribution, l'exclusion, l'affinité, etc., leur temps de rétention dans la phase stationnaire varie également. En effet, les Constituents qui interagissent faiblement avec la phase stationnaire et qui se déplacent plus rapidement avec la phase mobile sortent d'abord de la colonne chromatographique; Alors que les composants serrés sont combinés avec la fixation, le mouvement est plus lent, après quoi la colonne de chromatographie s'écoule. Grâce à ce processus, les groupes du mélange sont séparés un par un. De plus, l'effet de séparation dépend non seulement de la différence de coefficient de partage du soluté entre les deux phases (facteur thermodynamique), mais aussi de facteurs cinétiques tels que le coefficient de diffusion, la granulométrie de la phase stationnaire, le remplissage de la colonne et le débit de la phase mobile.

Précautions d'emploi de la chromatographie liquide:

1. Sélection et traitement de phase mobile

- un solvant de qualité HPLC ou supérieure doit être choisi, l'eau doit être utilisée avec de l'eau distillée secondaire ou de l'eau ultra - pure et est maintenant disponible pour empêcher les micro - organismes de contaminer le système.

- après la formulation de la phase mobile, vous devez revenir à la température ambiante et l'utiliser pour éviter les différences de température entraînant des performances instables.

- lors de l'utilisation d'une solution saline tamponnée, il est nécessaire de la filtrer et de laver la voie d'écoulement avec de l'eau pure avant et après l'utilisation, il est interdit de laisser la solution saline tamponnée dans la voie d'écoulement et de la laisser reposer. Dans le même temps, la colonne de chromatographie doit d'abord être rincée avec une faible proportion de phase organique (la teneur en phase organique n'est pas inférieure à 5), puis conservée avec une forte proportion de phase organique, en évitant le retrait tampon. Essayez d'éviter d'utiliser des concentrations élevées de sels tampons de phosphate (> 10 mmol / l).

- Essayez d'éviter d'utiliser de l'acétonitrile pur comme phase mobile au cas où la polymérisation de l'acétonitrile entraînerait une désorption. Il est recommandé d'utiliser une bouteille brune pour le stockage lorsqu'il n'est pas disponible.

2. Spécifications opérationnelles

- le démontage à l'état de bande pressurisée est interdit à la jonction de la ligne haute pression.

- Soyez prudent lors de l'ajustement du débit, évitez les changements brusques de pression et de température et évitez les chocs sur le remplissage interne de la colonne.

- la modification de la composition en solvant de la solution d'échantillon de détection doit être effectuée progressivement, en particulier en chromatographie en phase inverse, sans remplacer directement le solvant organique par de l'eau pure ou inversement.

- la source lumineuse du détecteur UV doit être refroidie pendant 30 minutes avant de s'éteindre.

3. Maintenance de sécurité

- les déchets liquides doivent être triés pour la collecte et les déchets organiques ne doivent pas être rejetés directement.

- l'entretien régulier de l'instrument, comme le lavage des aiguilles d'échantillonnage, le remplacement des joints d'étanchéité, etc.