La chromatographie liquide permet de traiter des mélanges de composition complexe, de grandes différences de polarité ou de faible stabilité. En choisissant les gradients de phase stationnaire et de phase mobile appropriés, il permet une séparation efficace des substances à haut point d'ébullition, macromoléculaires, thermiquement instables telles que les protéines, les polysaccharides, les résidus de pesticides et sans chauffage à haute température, évitant les problèmes de décomposition des substances. La combinaison d'un système d'échantillonnage de haute précision et d'un détecteur de haute sensibilité (tel qu'un détecteur UV, un détecteur de fluorescence, un détecteur de spectrométrie de masse, etc.) permet de répondre aux besoins de détection de substances traces (à des concentrations aussi faibles que le niveau µg / l ou même ng / l). En ce qui concerne l'analyse qualitative, il est possible d'identifier avec précision la composition de la substance par une double vérification du temps de rétention et du spectre caractéristique ou du spectrogramme de masse; En termes d'analyse quantitative, l'utilisation de méthodes matures telles que l'étalon externe et l'étalon interne permet d'obtenir un calcul précis de la concentration de la substance.

La chromatographie liquide utilise le liquide comme phase mobile, en raison de la grande résistance à laquelle le liquide est soumis lorsqu'il traverse la colonne de chromatographie, il est nécessaire d'appliquer une pression élevée sur le liquide porteur (généralement jusqu'à 150 ~ 35000 kPa) pour s'assurer que la phase mobile peut passer rapidement à travers la colonne de chromatographie. Dans le même temps, le débit de la phase mobile dans la colonne est également beaucoup plus rapide que la chromatographie liquide classique (généralement jusqu'à 1 à 10 ml / min), ce qui réduit considérablement le temps d'analyse. Le détecteur de haute sensibilité a été largement adopté, améliorant encore la sensibilité de l'analyse. Par exemple, la sensibilité du détecteur de fluorescence peut atteindre le niveau de 10 g, et la quantité d'échantillon est faible, généralement quelques microlitres.

Contrairement à la chromatographie en phase gazeuse, la chromatographie liquide n'est pas limitée par la volatilité de l'échantillon et permet l'analyse de matières organiques ayant un point d'ébullition élevé, une mauvaise stabilité thermique et un poids moléculaire relatif élevé (supérieur à 400). Ces substances représentent près de 75 à 80% de la matière organique totale et peuvent en principe être isolées et analysées par chromatographie liquide à haute performance. Il est généralement équipé d'un système d'échantillonnage automatisé et d'un logiciel de traitement des données, ce qui rend le processus d'exploitation plus facile et plus rapide et réduit le risque d'erreur manuelle.

Etapes de détermination par chromatographie liquide:

1. Prétraitement des échantillons

- Extraction: peser l'échantillon d'environ 10 g (exactement 0,1 g) dans un Erlenmeyer de 100 ml, ajouter 60 ML d'extrait mixte et 2 g de chlorure de sodium, agiter pendant 30 min. On filtre sur entonnoir de filtration avec des pores de 80 - 120 µm et on lave le résidu avec 3 x 10 ml d'extrait mixte. Combiner le filtrat et la lotion dans un bécher de 250 ml. Chauffer dans l'eau bouillante pendant 30 min, enlever, centrifuger à 3000r / min pendant 20 min, mettre au réfrigérateur à 4 ℃ pour refroidir pendant 20 min, puis filtrer à travers l'entonnoir de filtration avec des trous de filtration de 40 à 80 μm, recueillir le filtrat.

- purification: si la composition de l'échantillon est complexe, vous pouvez utiliser l'extraction en phase solide et d'autres méthodes pour la purification supplémentaire.

- capacité concentrée: l'extrait est concentré à sec avec un souffleur d'azote, au volume approprié avec du méthanol, à mesurer après passage sur une membrane de filtration microporeuse de 0,22 µm.

2. Préparation des instruments

- formulation de la phase mobile: Choisissez un solvant de qualité HPLC ou supérieure, formulez la phase mobile proportionnellement et Filtrez - la avec une membrane filtrante de 0,22 µm, utilisez le bouchon du flacon avec un orifice d'échappement.

- installation de la colonne de chromatographie: installez correctement la colonne de chromatographie dans le réservoir de la colonne, connectez les bonnes lignes et assurez - vous qu'il n'y a pas de fuites.

- Équilibre du système: rincer le système avec une phase mobile pendant au moins 30 minutes jusqu'à stabilisation de la ligne de base.

3. Analyse des échantillons

- Chargement de l'échantillon: injecter la solution de l'échantillon dans l'anneau d'admission, en prenant soin d'éviter la création de bulles.

- acquisition de données: démarrage de la station de chromatographie, début de l'acquisition des données, enregistrement du chromatogramme.

4. Traitement des données

- Quantitative qualitative: qualitative selon le temps de rétention, quantitative selon la méthode des indices externes ou internes.

- Rapport des résultats: calculer la teneur en composés cibles dans l'échantillon et produire un rapport de test.