Préparation avant la mise en conserve
Préparation de la suspension cellulaire: les cellules préculturées sont collectées à partir d'un shaker ou d'une boîte de pétri, mélanger et prendre 1 mL pour le comptage des cellules, en veillant à ce que la densité d'inoculation soit appropriée.
Stérilisation de l'équipement: vérifiez que le corps du réacteur, les tuyaux et les électrodes ont été stérilisés (par exemple, traitement à la vapeur à haute pression à 121 ° c) pour éviter la contamination microbienne.
Milieu de culture avec tampon: préparer une quantité suffisante de milieu de culture et pré - ajuster le pH à la plage cible (par exemple, 7,2 - 7,4), après stérilisation, laisser refroidir pour la sauvegarde.
Inoculation et culture initiale
Opération aseptique: dans une armoire de sécurité biologique, la suspension cellulaire est transférée à l'intérieur du réacteur par un conduit stérile, tandis que le mélange est assisté par l'air comprimé.
2, paramètres:
Température: les cellules de mammifères sont généralement fixées à 37 °C.
Oxygène dissous (do): initialement fixé à 40%, la stabilité est maintenue par mélange gazeux (o₂ / n₂ / co₂).
Contrôle du pH: utilisez une pompe péristaltique pour compléter avec de l'acide / de la base ou passer à la régulation du co₂ et maintenir le pH entre 6,5 et 7,0 (ajustement du type de cellule apparente).
Iii. Surveillance du processus de culture
Échantillonnage régulier: prélèvement en ligne toutes les 24 heures pour détecter la densité cellulaire, le pH et la concentration de métabolites (par exemple, Glucose, acide lactique).
2, flux plus suppléments: flux plus milieu concentré ou ingrédients spécifiques (tels que les acides aminés) pour prolonger la période de croissance logarithmique des cellules, en fonction de la consommation de nutriments.
Contrôle de la force de cisaillement: utilisez une agitation à faible vitesse de rotation (par exemple, 50 - 100 tr / min) ou un réacteur à vagues pour éviter les dommages mécaniques.
Récolte et nettoyage
Arrêt de la culture: désactivez le système de contrôle automatique lorsque les cellules entrent en phase de dépérissement ou lorsque l'accumulation de produit atteint un pic.
Évacuation et collecte: les cellules sont séparées du surnageant en vidant le liquide de culture dans un bac à déchets par de l'air comprimé.
3, nettoyage et stérilisation: rincez le réservoir et les composants avec de l'eau purifiée, laissez tremper l'hydroxyde de sodium 0,1 m pendant la nuit pour assurer l'absence de résidus.
V. précautions
Opération aseptique: le processus complet doit strictement éviter la contamination, désinfecter les gants et les outils avant l'opération.
2, étalonnage paramétrique: Vérifiez régulièrement le pH, l'électrode à oxygène, assurez - vous que les données sont exactes.
Production amplifiée: l'opération par lots peut être directement amplifiée à l'échelle industrielle (par exemple 12 000 l), mais nécessite une agitation et un transfert de masse optimisés.
Avec les étapes ci - dessus, le fonctionnement du Bioréacteur de culture cellulaire peut être complété efficacement, adapté à la production d'anticorps monoclonaux, de vaccins et d'autres produits biologiques.