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HORIBA (China)
Résumé du processus opérationnel des spécifications du spectromètre à fluorescence moléculaire
Date :2025-08-21Lire :1
Dans les domaines de la chimie, de la biologie, des matériaux et de la recherche pharmaceutique, le spectromètre de fluorescence moléculaire sert de sonde pour révéler les propriétés microluminescentes de la matière, générer de la fluorescence par excitation de l'échantillon, déterminer son spectre d'émission, son spectre d'excitation, son intensité de fluorescence et sa durée de vie, etc., largement utilisés dans l'analyse conformationnelle des protéines, la détection de l'ADN, le développement de sondes fluorescentes et l'identification des polluants environnementaux. La haute sensibilité (jusqu'à l'échelle ppb) et la sélectivité des spectromètres à fluorescence moléculaire en font un choix pour les laboratoires modernes. Pour assurer l'exactitude des données et la stabilité de l'instrument, il est nécessaire de suivre des processus opérationnels scientifiques et normalisés.
Première étape: préparation de l'environnement et préchauffage de l'instrument
Assurez - vous que l'environnement de laboratoire est propre, protégé de la lumière et stable en température (20 - 25 ° c), évitez les vibrations fortes et les interférences électromagnétiques. Allumez l'appareil et démarrez la source lumineuse (lampe au xénon ou laser), l'unité principale et le système de refroidissement (si nécessaire). Préchauffer pendant 30 minutes pour stabiliser la sortie de la source lumineuse, maintenir la température du détecteur constante et éviter la dérive de la ligne de base.
Étape 2: préparation de l'échantillon et chargement de l'échantillon
Formuler des échantillons de solution à la concentration appropriée en fonction des besoins de l'essai, en évitant les concentrations trop élevées conduisant à une "auto - absorption" ou à une "extinction par fluorescence". Utilisez un quartz propre que la boîte de couleur (le verre absorbe fortement la lumière ultraviolette et ne convient pas), injectez le liquide à 2 / 3 - 3 / 4 de la hauteur de la boîte. Essuyez les empreintes digitales de la paroi de la boîte avec les gouttelettes, Alignez la ligne de marquage de la boîte colorimétrique dans la direction du chemin optique, placez - la légèrement dans le bac à échantillons et évitez de rayer la surface optique.
Étape 3: réglage des paramètres et sélection du mode
Réglage du mode de test via le logiciel de contrôle:
Spectre d'émission: longueur d'onde d'excitation fixe, balayage de la gamme de longueurs d'onde d'émission;
Spectre d'excitation: longueur d'onde d'émission fixe, longueur d'onde d'excitation de balayage;
Analyse quantitative: régler la longueur d'onde fixe d'excitation / émission, mesurer l'intensité de fluorescence.
Réglez les paramètres tels que la largeur de la fente (qui affecte la résolution et la sensibilité), le temps d'intégration, la vitesse de balayage, etc., équilibrant le rapport signal / bruit avec l'efficacité du test.
Étape 4: correction de fond avec balayage de base
D'abord mettre dans un solvant vide (par exemple, l'eau désionisée, l'éthanol) boîte de couleur, effectuer une « déduction de fond» ou « correction de base», éliminer la diffusion Raman du solvant avec le signal de fond de l'instrument. Cette étape est particulièrement critique pour les échantillons à faible intensité de fluorescence.
Étape 5: mesure des échantillons et acquisition des données
Remplacez - le par l'échantillon à tester, lancez le balayage. Observez la courbe spectrale en temps réel et confirmez qu'il n'y a pas de pics anormaux ou de bruit. Les échantillons clés peuvent être scannés à plusieurs reprises pour vérifier la reproductibilité. Si vous effectuez des mesures de durée de vie de fluorescence, vous devez passer en mode de comptage de photons uniques dépendant du temps (tcspc), en utilisant une source de lumière pulsée et un détecteur à grande vitesse.
Étape 6: sauvegarde des données et Réinitialisation de l'instrument
Une fois le test terminé, enregistrez les données dans le chemin spécifié pour les exporter dans un format commun (par exemple.Csv,.Txt). Retirez l'échantillon, lavez la cuve avec un solvant et laissez sécher. Éteignez la source lumineuse (en particulier les lampes au xénon, évitez les interrupteurs fréquents), l'hôte et le logiciel. Lorsqu'il n'est pas utilisé pendant une longue période, couvrez le pare - poussière.