Kit de détection ELISA pour la 1,5 - diphosphate ribulose carboxylase végétale (Rubisco) fiche technique

BS - 4938 Kit ELISA 96T / 48T pour 1,5 - diphosphate ribulose carboxylase végétale (Rubisco)

Présentation du produit

Ce kit est destiné à la détection quantitative in vitro de l'activité de la Ribulose - 1,5 - diphosphate carboxylase / oxygénase (Rubisco) dans les tissus végétaux, les cellules et les échantillons liquides associés. L'enzyme est l'enzyme clé du cycle Calvin de photosynthèse des plantes et son activité influence directement le taux de photosynthèse et le processus de Photorespiration. Ce kit utilise la méthode d'immunoadsorption double anticorps - sandwich (ELISA) avec une sensibilité et une spécificité élevées.

Principe de détection

Le kit utilise la méthode sandwich en une étape à double anticorps:

Préencapsulation de l'enzyme cible capturée dans l'échantillon par microplaque anti - Rubisco - mumab

L'ajout d'anticorps de détection marqués HRP forme un complexe 'anticorps - antigène - anticorps marqueur enzymatique'

Après lavage net, le substrat chromogène TMB est ajouté

Après la fin de la réaction, l'Absorbance (valeur OD) est déterminée par un étalon enzymatique à une longueur d'onde de 450 nm.

La concentration de Rubisco dans l'échantillon est positivement corrélée à la valeur OD

Composition du kit

Spécifications des composants conditions de conservation

Pré - emballé par microplaque 12 x 8 puits 4℃

Standard (6 gradients de concentration) 0,3 ml × 6 tubes - 20 ℃

Anticorps marqueur enzymatique 15ml 4℃

20 × tampon de lavage 50ml température ambiante

TMB Color Rendering Liquid A / B 15 ml chacun 4 ℃ protégé de la lumière

Liquide de terminaison 15 ml température ambiante

Dilution de l'échantillon 30ml 4℃

Traitement des échantillons

échantillon d'organisation

Peser 0,1 g de tissu et ajouter 1 mL d'homogénat de bain de glace de liquide d'extraction

10000g 4 ℃ centrifuger pendant 10 minutes

Prendre le surnageant pour la détection immédiate ou - 80 ℃ pour la conservation (éviter la congélation et la dégel répétées)

Échantillons de cellules

Recueillir le précipité cellulaire, ajouter l'extrait pour lyse

10000g 4 ℃ centrifuger pendant 10 minutes

Prélèvement du surnageant détection

échantillons de sérum / liquide

Laisser reposer à température ambiante pendant 2 heures ou 4 ° C pendant la nuit

Centrifugation à 1000g pendant 20 minutes

Prélèvement du surnageant détection

Précautions:

Éviter l'hémolyse de l'échantillon

Nan3 inhibe l'activité HRP

Les échantillons frais sont prioritaires, les échantillons congelés évitent la congélation et la dégel répétées

Étapes opérationnelles

Préparation des réactifs: tous les réactifs sont équilibrés à température ambiante (20 - 25 ° c) avant utilisation

Ajout:

Trou Standard: 50 μl de différentes concentrations standard

Trou d'échantillon: 50 μl échantillon à mesurer

Trou vide: non plus

Incubation: 100 µl d'anticorps marqueur enzymatique ajoutés par puits, réaction à 37°c à l'abri de la lumière pendant 60 minutes

Lavage: ajouter 350 μl de liquide de lavage par puits, laisser sécher après 1 minute et répéter 5 fois

Rendu des couleurs: ajout de 50 µl de substrats a et B par puits, réaction à 37°c à l'abri de la lumière pendant 15 minutes

Terminaison: ajouter 50 µl de liquide de terminaison par puits

Dosage: 450 nm valeur od déterminée avec un étalon enzymatique en 15 minutes

Calcul des résultats

Dessiner la courbe standard en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur OD

Concentration mesurée sur une courbe standard en fonction de la valeur od de l'échantillon

Concentration de l'échantillon = concentration mesurée × multiple de dilution (le cas échéant)

Indicateurs de performance

Plage de détection: 18 - 650 U / l

Sensibilité: ≤ 5 U / l

Coefficient de variation intra - Lot: < 10%

Coefficient de variation entre lots: < 15%

Précautions

Kit valable 6 mois, 2 - 8 ℃ Conservation

Réactifs de numéro de lot différent non mélangeables

Conservation du liquide de rendu des couleurs à l'abri de la lumière

Un lavage impur conduit à de faux positifs

Liquide de terminaison contenant des substances corrosives, protection requise lors du fonctionnement

Tous les déchets traités selon les risques biologiques

Instruments nécessaires

Jauge enzymatique (filtre 450nm)

Pipette de précision (0,5 - 1000 μl)

37 ℃ boîte de température constante

Machine à laver les plaques (facultatif)

Mélangeur Scroll

Remarque: pour l'utilisation scientifique, les informations ci - dessus pour référence, ne sont pas utilisées comme base expérimentale, veuillez consulter le professeur de technologie est ou marque.

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