Kit de détection ELISA pour lignine microbienne (Lignin) fiche technique

BS - 5184 Kit ELISA pour lignine microbienne (Lignin)

1. Aperçu du produit

Ce kit utilise la méthode ELISA (double anticorps Sandwich Enzyme linked immunosorption) dédiée à la détection quantitative de la teneur en lignine des échantillons de ferments microbiens, lysats cellulaires, etc. La lignine est un polymère aromatique produit lors du métabolisme microbien ou de la dégradation des parois cellulaires des plantes, dont la teneur peut varier pour refléter l'efficacité de l'utilisation microbienne de la lignocellulose.

2. Principe de détection

Les paquets d'anticorps en phase solide sont capturés par microplaque dans l'échantillon de lignine, puis ajoutés à l'anticorps de détection de marqueur enzymatique pour former un complexe "anticorps - antigène - anticorps marqueur enzymatique". Le substrat TMB est ajouté après lavage pour le rendu des couleurs et l'Absorbance est déterminée à une longueur d'onde de 450 nm, la valeur de l'Absorbance étant positivement corrélée à la concentration en lignine.

3. Composition du kit

Composant 96 configuration de trou 48 configuration de trou conditions de sauvegarde

Plaque de marquage enzymatique microporeuse 12 puits × 8 bandes 12 puits × 4 bandes 2 - 8 ℃ scellé sec

Standard (lignine) 0,5 ml × 6 tubes 0,5 ml × 6 tubes - 20 ℃ protégé de la lumière

Dilution de l'échantillon 6 ML 3 ml 2 - 8 ℃

Anticorps marqueur enzymatique - hrp 10ml 5ml 2 - 8 ℃ protégé de la lumière

20 × tampon de lavage 25ml 15ml température ambiante

TMB liquide de rendu des couleurs 9ml 4.5ml 2 - 8 ℃ protégé de la lumière

Liquide de terminaison 9ml 4,5ml température ambiante

Film de scellement 2 feuilles 2 feuilles température ambiante

4. Traitement des échantillons

4.1 ferments microbiens

8000 × G centrifugation pendant 10 minutes pour éliminer les bactéries

Prendre le surnageant pour la détection immédiate ou - 80 ℃ stockage de congélation (éviter la congélation répétée et la dégel)

4.2 lysats cellulaires

Centrifugation à 12000 × g pendant 15 minutes après broyage aux ultrasons

Détection après prélèvement du surnageant dilué 10 fois avec du PBS

4.3 précautions

Filtration sur membrane filtrante de 0,22 μm pour la turbidité de l'échantillon

Évitez les échantillons contenant de l'azide sodique (inhibition de l'activité HRP)

5. Étapes expérimentales

5.1 préparation des réactifs

Tampon de lavage: eau distillée diluée 20x à 1x liquide de travail

Gradient Standard: diluer à 0 - 60 μg / ML selon les instructions

5.2 additions

50 µl de chaque étalon / échantillon sont ajoutés aux micropores correspondants

Incuber à 37 ° C pendant 30 minutes

5.3 lavage

Ajouter 300 μl de liquide de lavage par puits, sécher après 1 minute de repos

Répéter 5 fois

5.4 rendu des couleurs

100 µl d'anticorps marqueur enzymatique par puits incubé à 37 °C pendant 30 minutes

Ajouter TMB Color render liquide 90µl après lavage, à l'abri de la lumière pendant 15 minutes

Ajout de liquide de terminaison 50 µl pour terminer la réaction

5.5 détermination

Valeur od pour la détermination de la longueur d'onde de 450 nm (longueur d'onde de référence 630 nm)

6. Calcul des résultats

La courbe standard est tracée en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od. La concentration de l'échantillon est calculée à l'aide de l'équation de la courbe, au - delà de laquelle la dilution doit être répétée après dilution.

7. Indicateurs de performance

Paramètres indicateurs

Sensibilité ≤ 0,5 μg / ml

Plage de détection 1 - 60 μg / ml

Précision CV intra - Lot < 8%, CV inter - Lot < 12%

Taux de récupération 85% - 115%

8. Précautions

Le kit doit être équilibré à température ambiante pendant 30 minutes avant utilisation

Réactifs de numéro de lot différent non mélangeables

Liquide de terminaison contient un acide fort, porter un équipement de protection lors de l'opération

Liquide chromogène pour éviter le contact avec les ions métalliques

Micropipette à calibrer pour éviter la contamination croisée

9. Durée de validité

6 mois (2 - 8 ° C de conservation)

10. Déclaration

Ce produit est destiné à un usage scientifique uniquement.

Remarque: ci - dessus est pour référence seulement, ce réactif est pour l'usage scientifique seulement, pas comme données réelles, l'expérience doit suivre strictement les instructions ou consulter le professeur technique.

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