Description technique du kit de détection ELISA de l'interleukine humaine 23 (il - 23)

BS - 0194 Interleukine humaine 23 (il - 23) ELISA Kit Kit natif

I. Aperçu du produit

Ce kit utilise la technologie ELISA (double anticorps Sandwich Enzyme linked immunosorption test) pour la détection quantitative des concentrations d'interleukine 23 (il - 23) dans le sérum, le plasma, les homogénats de tissus et les surnageants cellulaires humains. Les composants de base comprennent des plaques enzymatiques pré - encapsulées pour les anticorps, des étalons, des anticorps de détection marqués à la biotine et des substrats chromogènes (TMB), assurant une sensibilité et une spécificité élevées (aussi faibles que 0,15 pg / ML). L'expérience dure environ 3,5 heures, convient aux expériences de recherche scientifique et interdit strictement l'utilisation de diagnostic clinique. ‌

II. Principe de détection

Liaison de l'anticorps: l'il - 23 se lie à l'anticorps capturé préemballé pour former un complexe. ‌

Ajouter des anticorps de détection biotinylés et de la streptavidine marquée à la peroxydase de raifort, colorer par une réaction enzymatique.

Analyse quantitative: après coloration du substrat TMB, le liquide de terminaison termine la réaction, la longueur d'onde de 450 nm mesure la valeur de l'Absorbance et la concentration en il - 23 est positivement corrélée à la valeur de do. ‌

Iii. Composition du kit

| composants | spécifications / quantités | Conditions de stockage |

| - | | - |

| Plaque de marquage enzymatique pré - encapsulée | 96 puits / plaque | 2 - 8 ℃ protégé de la lumière |

| standard (poudre lyophilisée) | 2 bouteilles | - 20 ℃ longue conservation |

| anticorps marqués à la biotine | 1 branche (concentré) | 2 - 8 ℃ court terme |

| substrat de rendu des couleurs (TMB) | 12 ml | 2 - 8 ℃ protégé de la lumière |

| liquide de terminaison | 12 ml | température ambiante |

| 20 × liquide de lavage | 50 ml | température ambiante |

Remarque: les dilutions d’échantillons doivent être sélectionnées en fonction du type d’échantillon (sérum / Plasma / surnageant cellulaire).

Iv. Traitement des échantillons

Sérum / plasma: coagulation à température ambiante pendant 30 minutes, centrifugation à 1000 × g pendant 15 minutes, prélèvement du surnageant pour éviter l’hémolyse.

Nettoyage des cellules: centrifugation directe pour éliminer les débris cellulaires, les échantillons non testés doivent être conservés à - 20 ° c après le fractionnement, éviter la congélation et la dégel répétées.

Homogénat tissulaire: le nettoyage est centrifugé après addition de l'homogénat de lysat au poids du tissu. ‌

V. Étapes opérationnelles

Équilibre des réactifs: tous les composants sont laissés à température ambiante pendant 20 minutes et le bain - Marie de liquide de lavage concentré dissout la cristallisation. ‌

Réaction d'addition:

Les puits étalons enzymatiques sont ajoutés après dilution du gradient étalon et le volume de l'échantillon est de 25 µl. ‌

L'anticorps de détection, le complexe marqueur enzymatique sont ajoutés successivement et incubés à 37°c pendant 60 minutes.

Rendu des couleurs par lavage: le liquide de lavage est lavé 3 fois, le substrat TMB est ajouté pour réagir à l'abri de la lumière pendant 15 minutes et le liquide de terminaison est terminé. ‌

Lecture: mesure de la valeur de do à la longueur d'onde de 450 nm avec un ajustement à quatre paramètres pour calculer la concentration.

Vi. Paramètres de performance

Plage de détection: 15,6 à 1000 pg / ML (intervalle linéaire).

Sensibilité: 0,15 pg / ML.

Précision: coefficient de variation (CV) intra / Inter - plaques < 10%. ‌

Taux de récupération: 80% - 120%.

Vii. Précautions

Protection de sécurité: Portez des gants et des lunettes pour éviter tout contact avec le liquide de terminaison et le substrat TMB. ‌

Conservation des réactifs: le kit non ouvert 2 - 8 ℃ peut être conservé pendant 6 mois, - 20 ℃ pendant 1 an; Le réactif ouvert est épuisé dans les 7 jours.

Spécifications expérimentales:

Le mélange des différents lots de réactifs est interdit. ‌

Tamponner la plaque de marquage enzymatique sèche lors du lavage pour éviter que le papier absorbant ne touche directement l'intérieur du trou. ‌

La réaction de rendu des couleurs doit être protégée de la lumière et lue dans les 30 minutes suivant la fin.

Remarque: ce qui précède est à titre indicatif seulement et n'est pas considéré comme des données réelles, l'expérience doit suivre strictement les instructions ou consulter l'enseignant technique.