Kit de test ELISA pour l'interleukine humaine 22 (il - 22) fiche technique

BS - 1649 Kit ELISA pour Interleukine 22 humaine (il - 22)

I. Aperçu du produit

Ce kit utilise la méthode ELISA (double anticorps Sandwich Enzyme linked immunosorption) pour la détection quantitative de la concentration d'interleukine 22 (il - 22) dans le sérum humain, le plasma ou les surnageants de culture cellulaire. L'il - 22 est une cytokine sécrétée par les lymphocytes T activés, les cellules NK, etc., qui jouent un rôle important dans la réponse inflammatoire, la réparation des tissus et l'immunomodulation. Ce kit est caractérisé par une sensibilité élevée, une spécificité élevée et une bonne répétabilité, il convient aux expériences de recherche scientifique et aux tests cliniques.

II. Principe de détection

Anticorps encapsulé: un anticorps monoclonal anti - il - 22 humain est pré - encapsulé dans une microplaque qui se lie à l'il - 22 dans l'échantillon pour former un complexe en phase solide.

Anticorps marqué à la biotine: un anticorps anti - il - 22 humain marqué à la biotine est ajouté et se lie à l'il - 22 pour former une structure sandwich.

Conjugué enzymatique: ajout de Streptavidine marquée à la peroxydase de raifort (HRP) qui se lie spécifiquement à la biotine.

Réaction de rendu des couleurs: le substrat (TMB) est ajouté pour rendre les couleurs, la nuance de couleur étant directement proportionnelle à la concentration en il - 22.

Terminaison et dosage: ajout du liquide de terminaison pour terminer la réaction, détermination de l'Absorbance (valeur OD) à une longueur d'onde de 450 nm, calcul de la concentration de l'échantillon par une courbe standard.

Iii. Composition du kit

Composants spécifications quantité

Pré - emballé par microplaque 96 puits / plaque 1 pièce

Standard (lyophilisé) 2ng / bâtonnet 2 bâtonnets

Dilution standard 10ml 1 flacon

Anticorps marqué à la biotine 6ml 1 flacon

Streptavidine marquée HRP 6ml 1 flacon

Liquide de lavage (20×) 50ml 1 flacon

Liquide de rendu des couleurs (TMB) 11ml 1 flacon

Solution de terminaison (2m h₂so₄) 6ml 1 flacon

Iv. Exigences relatives aux échantillons

Sérum / plasma: après le prélèvement, laisser reposer à température ambiante pendant 30 minutes, centrifuger (2000 × G, 15 minutes) pour prélever le surnageant, - 20 ° C ou - 80 ° C pour conserver, en évitant la congélation et la dégel répétés.

Éclaircissement de la culture cellulaire: la centrifugation élimine les débris cellulaires, les détecte immédiatement ou les conserve en sous - assemblage.

Précautions: Évitez les conservateurs tels que l'azide de sodium (nan₃) ou l'EDTA dans l'échantillon afin de ne pas compromettre les résultats des tests.

V. Étapes opérationnelles

Dilution de l'étalon: les étalons lyophilisés sont redissous à 2 ng / ML avec une dilution de l'étalon, diluée en proportions multiples (p. ex., 2 ng / ML, 1 ng / ML, 0,5 ng / ML, 0,25 ng / ML, 0125 ng / ML, 00625 ng / ML), les puits de 0 ng / ML étant des témoins vierges.

Addition: ajouter 100 µl d'étalon ou d'échantillon par puits et incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.

Lavage: retirez le liquide à l'intérieur des pores et lavez la plaque 3 fois avec le liquide de lavage, chaque fois pendant 1 minute.

Anticorps marqués à la biotine: 100 µl sont ajoutés par puits et incubés à 37°c pendant 60 minutes.

Conjugué enzymatique: 100 µl sont ajoutés par puits et incubés à 37°c pendant 30 minutes.

Rendu des couleurs et terminaison: ajouter 90 μl de TMB par puits, éviter le rendu de la lumière pendant 15 minutes et ajouter 50 μl de liquide de terminaison.

Détermination: la valeur od est lue à une longueur d'onde de 450 nm, une courbe standard est tracée et la concentration de l'échantillon est calculée.

Vi. Calcul des résultats

La courbe standard est tracée avec la concentration du standard en abscisse et la valeur od en ordonnée.

Correspond à la concentration sur la courbe standard en fonction de la valeur od de l'échantillon, multipliée par un multiple de dilution (1 si l'échantillon n'est pas dilué).

Il est recommandé d'utiliser un logiciel professionnel tel que ELISA Calc pour l'ajustement de la courbe et le calcul de la concentration.

Vii. Indicateurs de performance

Sensibilité: la limite de détection est de 0015 ng / ML.

Précision: coefficient de variation (CV) intra - Lot < 10%, CV inter - Lot < 15%.

Plage linéaire: 00625 - 2 ng / ML, coefficient de corrélation (r²) > 0,99.

Taux de récupération: les échantillons de concentration élevée, moyenne et faible sont soumis à une récupération pondérée avec un taux de récupération compris entre 85% et 115%.

Spécificité: aucune réaction croisée avec les Cytokines il - 10, il - 17, il - 23, etc.

Viii. Précautions

Conservation du réactif: kit non ouvert 2 - 8 ℃ conservation, date d'expiration 12 mois; Après l'ouverture des normes, des anticorps marqués à la biotine, des marqueurs HRP doivent être conservés sous forme de gel pour éviter la congélation et la dégel répétées.

Spécifications de fonctionnement: Évitez de créer des bulles d'air lors du pipetage et assurez - vous que le liquide à l'intérieur des pores est éliminé lors du lavage.

Protection de sécurité: le liquide de terminaison contient un acide fort et porte des gants et des lunettes de protection lors de son utilisation.

Contrôle de la qualité: chaque lot d'expérience doit être soumis à une double vérification des trous, et la détection doit être répétée si la valeur od est anormale.

Ix. Analyse des questions fréquemment posées

Problème phénomène causes possibles solutions

Courbe standard différence linéaire standard dilution erreur reformulation standard, assurer la dilution du rapport de multiplication

Valeur od de l'échantillon trop élevée concentration de l'échantillon hors de la plage de détection nouvelle détection après dilution de l'échantillon

Activation des conjugués enzymatiques chromogènes trop clairs ou non chromogènes vérifier la date d'expiration du réactif, remplacer un nouveau réactif

Après le lavage, il y a des liquides résiduels dans le trou nombre de lavage insuffisant ou pas assez fort pour augmenter le nombre de lavage, battre fermement la plaque de trou sec

Remarque: ci - dessus est pour référence seulement, ce réactif est pour l'usage scientifique seulement, pas comme données réelles, l'expérience doit suivre strictement les instructions ou consulter le professeur technique.

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