Kit de test ELISA pour la Glutathion peroxydase humaine 4 (gpx4) fiche technique

BS - 9843 Kit ELISA pour Glutathion peroxydase humaine 4 (gpx4)

Présentation du produit

Ce kit utilise la méthode ELISA (immunosorption enzymatique sandwich en une étape) à double anticorps pour la détection quantitative in vitro des concentrations de Glutathion peroxydase 4 (gpx4) dans des échantillons de sérum humain, de plasma, d'homogénats de tissus, de lysats cellulaires et de surnageants de culture cellulaire. Gpx4 est un membre clé de la famille des glutathion peroxydases, qui joue un rôle central dans l'inhibition de la mort du fer, le maintien de l'intégrité de la membrane cellulaire et la lutte contre le stress oxydatif en éliminant les peroxydes lipidiques par le prototypage catalytique du glutathion (GSH).

Principe de détection

Méthode sandwich à deux anticorps: le pack est lié à gpx4 dans l'échantillon par l'anticorps, l'anticorps marqué à la biotine forme un complexe et la streptavidine marquée à la peroxydase de raifort (HRP) Catalyse une réaction de rendu des couleurs dont l'intensité est proportionnelle à la concentration de gpx4 dans l'échantillon.

Spécificité: gpx4 peut être identifié spécifiquement, sans réaction croisée avec les analogues, assurant la précision de la détection.

Composition du kit

Spécifications / description des composants

Pré - encapsulé en microplaque plaque 96 puits contenant des anticorps anti - gpx4 humain

Poudre lyophilisée standard, protéine gpx4 humaine recombinante, remise en solution avec diluant avant utilisation

Anticorps liquide marqué à la biotine, anticorps anti - gpx4 humain marqué au HRP

Substrat chromogène (TMB) liquide, solution de 3,3 ', 5,5' - tétraméthylbenzidine

Solution de terminaison 2m acide sulfurique

Tampon de lavage 20 x concentré avec Tween - 20

Tampon de dilution d'échantillon pour la dilution d'échantillons à haute concentration

Film de plaque d'étanchéité transparent pour l'étanchéité de microplaques

Traitement et conservation des échantillons

Types d'échantillons: sérum, plasma, homogénat de tissus, lysat cellulaire, surnageant de culture cellulaire, etc.

Méthode de traitement:

Sérum / plasma: centrifugation (3000 RPM, 10 min) après coagulation à température ambiante, le surnageant est prélevé.

Homogénat tissulaire: préparer un homogénat à 10% avec de la saumure physiologique et centrifuger pour enlever le limpide.

Lysats cellulaires: après lyse, centrifugation (15 000 RPM, 10 min), le surnageant est prélevé.

Conditions de conservation: à court terme (≤ 7 jours) 2 - 8 ℃ conservation, à long terme (> 7 jours) besoin de sous - ensemble - 20 ℃ stockage de congélation, éviter la congélation répétée et la dégel.

Étapes opérationnelles

Dilution de l'étalon: diluer l'étalon séquentiellement à 1000 avec la dilution de l'échantillon pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL Contrôle vide.

Addition: ajouter 100 µl d'étalon ou d'échantillon par puits et incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.

Lavage: vider le liquide à l'intérieur du trou, remplir chaque trou avec du liquide de lavage, laisser reposer pendant 30 secondes et jeter, répétez 5 fois, tapoter à sec.

Anticorps marqué à la biotine: 100 µl d'anticorps marqué à la biotine sont ajoutés par puits et incubés à 37°c pendant 60 minutes.

Substrat chromogène ajouté: ajouter 90 µl de substrat TMB par puits et incuber à 37 ° C à l'abri de la lumière pendant 15 - 30 minutes.

Réaction de terminaison: 50 µl de liquide de terminaison sont ajoutés par puits et l'Absorbance est déterminée immédiatement après mélange.

Calcul des résultats

Réglage de l'instrument: longueur d'onde de l'étalon enzymatique 450 nm (longueur d'onde de référence 630 nm).

Traitement des données: une courbe standard est tracée en prenant la concentration du produit standard (pg / ML) en abscisse et la valeur od en ordonnée. La concentration de l'échantillon est calculée à l'aide de l'équation de la courbe, multipliée par le multiple de dilution.

Sensibilité: 7,69 pg / ML, plage de détection 15,62 - 1000 pg / ML.

Précautions

Réaction croisée: aucune réaction croisée ne se produit avec des analogues tels que gpx1, gpx2, gpx3, etc.

Spécifications opérationnelles:

Le lavage doit être propre et éviter que le liquide résiduel n'affecte le résultat.

Le temps de rendu des couleurs est contrôlé à 15 - 30 minutes, ce qui évite les écarts de données causés par un rendu des couleurs excessif.

Les échantillons évitent la congélation et la dégel répétées pour éviter la dégradation des protéines.

Contrôle de la qualité: il est recommandé de mettre en place un test de répétition à deux trous pour chaque lot expérimental, avec une valeur CV < 10% qualifiée.

Conditions de stockage

Kit non ouvert: 2 - 8 ℃ conservation à l'abri de la lumière, valable 6 mois.

Après ouverture: les normes, les anticorps, les substrats et d'autres composants sont conservés selon les exigences du manuel d'instructions, afin d'éviter la congélation et la dégel répétées.

Cette description est destinée à un usage scientifique uniquement et ne s'applique pas au diagnostic clinique. Veuillez lire attentivement les instructions complètes avant l'opération et respecter les spécifications de sécurité du laboratoire.

Remarque: pour la recherche scientifique, les informations ci - dessus sont pour référence.

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