Instructions expérimentales pour le kit ELISA glutathion réductase (GSR) de rat

BS - 3507 rat glutathion réductase (GSR) ELISA Kit

I. principes expérimentaux

Ce kit utilise la méthode ELISA (double anticorps Sandwich Enzyme linked immunosorption) pour détecter l'activité de la glutathion réductase (GSR) chez le rat. Des packs d'anticorps anti - GSR de rat ont été placés dans des microplaques et, après addition à l'échantillon à tester, le GSR de l'échantillon est lié aux packs par des anticorps. L'anticorps de détection marqué à la biotine est ensuite ajouté pour former le complexe "anticorps antigène Enzyme". Après addition de Streptavidine (SABC) marquée à la peroxydase de raifort (HRP), l'Absorbance (do) a été déterminée à une longueur d'onde de 450 nm par coloration sur substrat TMB, la do étant positivement corrélée à la concentration de GSR dans l'échantillon.

II. Composition du kit

Composant 48 configuration de trou 96 configuration de trou conditions de sauvegarde

Pré - encapsulé par plaque de marquage enzymatique 8 x 6 Bandes 8 x 12 bandes 2 - 8℃

Standard (lyophilisé) 1 branche 1 branche 2 - 8℃

Norme / échantillon diluant 10ml 15ml 2 - 8 ℃

Anticorps de détection biotinylés 60 μl (100×) 120 μl (100×) - 20℃

Dilution d'anticorps biotinylés 6ml 12mL 2 - 8 ℃

Complexe SABC 6ml 12mL 2 - 8 ℃

TMB liquide de rendu des couleurs (A / b) 3ml chacun 6ml chacun protégé de la lumière 2 - 8 ℃

Liquide de terminaison 6ml 12mL 2 - 8 ℃

20 × solution de lavage concentrée 30ml 60ml température ambiante

Film d'étanchéité 2 comprimés 4 comprimés température ambiante

Instructions 1 exemplaire 1 exemplaire -

Iii. Traitement des échantillons

échantillons de sérum / plasma:

Le sang total est laissé à la température ambiante pendant 2 heures ou 4 ° C pendant la nuit, centrifugé à 1000 g pendant 20 minutes, le nettoyage est prélevé.

Évitez les échantillons hémolytiques ou hyperlipidiques, 2 - 8 ℃ peut être conservé pendant 48 heures; La conservation à long terme nécessite - 20 ℃ ou - 80 ℃, évitez le gel et la dégel répétés.

échantillons de tissus / cellules:

Après homogénat tissulaire ou lyse cellulaire, le surnageant est centrifugé et la concentration en protéines ajustée à la plage recommandée.

Iv. Étapes expérimentales

Formulation du liquide de lavage:

Diluer 20 fois le liquide de lavage concentré avec de l'eau distillée (par exemple 1 ml de concentré + 19 ml d'eau distillée).

Dilution Standard:

Prenez 7 tubes de centrifugation, notés 1 / 2, 1 / 4, 1 / 8, 1 / 16, 1 / 32, 1 / 64, vide (Blank).

Ajouter 200 µl de diluant étalon / échantillon par tube, 200 µl de diluant étalon / échantillon dans le premier tube, diluer étape par étape après mélange.

Ajout et incubation:

Ajouter 100 µl d'étalon ou d'échantillon par puits et incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.

Jeter le liquide et laver 3 fois (1 - 2 minutes par immersion).

Réaction des anticorps marqueurs enzymatiques:

100 µl d'anticorps de détection biotinylé (dilué au 1: 100) sont ajoutés par puits et incubés à 37°c pendant 60 minutes.

Laver 3 fois.

Réaction du complexe SABC:

100 µl de complexe SABC sont ajoutés par puits et incubés à 37°c pendant 30 minutes.

Laver 3 fois.

Rendu des couleurs et terminaison:

Ajouter 90 µl de liquide chromogène TMB par puits (mélange égal de liquide A / b) et incuber à 37 ° C pendant 15 minutes à l'abri de la lumière.

50 µl de liquide de terminaison sont ajoutés par puits et dosés immédiatement après malaxage.

V. Calcul des résultats

La courbe standard est tracée avec la concentration du standard en abscisse (X) et la valeur od en ordonnée (y).

La concentration GSR est calculée en substituant la valeur od de l'échantillon à l'équation de la courbe standard.

Vi. Précautions

Préservation des réactifs:

Standard, les anticorps biotinylés doivent être conservés à - 20 ℃, éviter la congélation et la dégel répétées; Les autres composants sont conservés à 2 - 8 ° c.

Traitement des échantillons:

Évitez d'utiliser des échantillons hémolytiques, hyperlipidiques ou turbides; Les échantillons de tissus doivent être suffisamment homogénatés.

Spécifications opérationnelles:

Le pipetage doit être précis pour éviter la contamination croisée; Le lavage est nécessaire, le liquide résiduel affecte le résultat.

Calibration des instruments:

La longueur d'onde de l'étalon enzymatique doit être calibrée à 450 nm, les trous blancs sont réglés à zéro.

Protection de sécurité:

Le liquide de terminaison contient de l'acide sulfurique, des gants et des lunettes sont portés lors de l'opération.

Vii. Résultats escomptés

Sensibilité: peut détecter GSR aussi bas que 0156 ng / ML.

Gamme linéaire: 0156 - 10 ng / ML.

Viii. Champ d'application

Ce kit est adapté pour la détection quantitative de GSR dans le sérum, le plasma, les homogénats de tissus et les surnageants de culture cellulaire de rat, à des fins scientifiques.

Conseil: Veuillez respecter les instructions réelles du kit pour les opérations spécifiques, lisez les instructions complètes et confirmez l'intégrité des composants avant d'expérimenter.

Remarque: ci - dessus est pour référence seulement, ce réactif est pour l'usage scientifique seulement, pas comme données réelles, l'expérience doit suivre strictement les instructions ou consulter le professeur technique.